寡核苷酸類(lèi)藥物檢測(cè)之尺寸排阻（SEC）色譜柱

隨著寡核苷酸藥物的研發(fā)步伐越來(lái)越快，對(duì)高純度寡核苷酸產(chǎn)品的需求也日趨旺盛。在今天的推送內(nèi)容里，我們將介紹尺寸排阻色譜法在寡核苷酸藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

在寡核苷酸的分析中，尺寸排阻分離模式是基于堿基數(shù)量、磷酸基不同導(dǎo)致的分子量差別進(jìn)行分離，通常用于簡(jiǎn)單的質(zhì)量控制或純度研究。該模式的優(yōu)點(diǎn)是可以使用接近生理?xiàng)l件的洗脫溶液進(jìn)行等度分離。有時(shí)也會(huì)添加水溶性有機(jī)溶劑來(lái)抑制疏水吸附。

分析不同堿基數(shù)目的寡核苷酸

下圖是采用兩根串聯(lián)的SEC色譜柱TSKgel UP-SW2000來(lái)區(qū)分長(zhǎng)度相差一個(gè)堿基的寡核苷酸混合物 (20-mer和N-1 19-mer)。

TSKgel UP-SW2000是東曹生命科學(xué)最新開(kāi)發(fā)的粒徑2μm、孔徑12.5nm的硅膠基質(zhì)SEC色譜柱，主要用于分離分子量范圍為1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。該色譜柱兼容HPLC和UHPLC系統(tǒng)，因此也能夠從傳統(tǒng)的HPLC-SEC方法轉(zhuǎn)換到UHPLC。

下圖是使用TSKgel G2000SWXL色譜柱分離不同堿基數(shù)量的合成寡核苷酸混合物的譜圖。為了抑制核酸酶活性，有時(shí)會(huì)在流動(dòng)相中添加EDTA等約1 mmol/L的螯合劑。

SEC法分離脂質(zhì)體包被的siRNA

下圖是使用TSKgel SuperSW2000色譜柱對(duì)天然型DNA核酸藥物Defitelio進(jìn)行質(zhì)量分析的示例。

參考文獻(xiàn)：Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.

寡核苷酸分析用SEC色譜柱

下表中列出了適用于核酸分離的SEC色譜柱。對(duì)于＜375 bp的短鏈核酸或寡核苷酸，UP-SW3000、UP-SW2000、G3000SWXL以及G2000SWXL這幾款色譜柱都是比較推薦的。